产品货号：
WH0096
中文名称：
小鼠组织直接PCR扩增试剂盒
英文名称：
Mouse Tissue Direct PCR Kit
产品规格：
50次|200次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒采用独特的包装体系，包含了快速制备小鼠组织基因组DNA和后续PCR扩增的所有试剂，适用于从小鼠尾巴、耳朵以及脚趾等组织中一步法提取基因组DNA并用于后续的PCR扩增和检测。整个提取过程不包含匀浆、破碎、过夜消化、酚氯仿抽提、DNA沉淀或柱式纯化等操作，实验操作简便、快捷，而且结果稳定可靠。
本试剂盒提供的2×Direct PCR MasterMix是一种高扩增兼容性的PCR试剂，无需彻底去除蛋白等杂质，便能进行高效特异扩增。该预混Mix包含抗体修饰的Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂和稳定剂，操作时只需加入粗提模板和引物即可进行后续检测，具有操作简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点，特别适合于高通量的检测筛选。Mix中预混有电泳染料，可在反应结束后直接进行电泳检测，使用方便快捷。PCR产物的3′端带A，可进行TA克隆。
产品特点：
·简单快速：适用于从小鼠尾巴、耳朵以及脚趾等组织中一步法基因鉴定。
·高特异性：本制品所用Taq酶为抗体修饰热启动酶，具有高效的模板和引物亲和性及扩增特异性，特别适合基因分型和转基因鉴定。
·基因检测：本制品操作简便，结果可靠，特别适合小鼠的高通量分析检测。
储存条件：组织裂解缓冲液Tissue Lysis Buffer和Digestive Enzyme在室温（15～25℃)干燥条件下可保存12个月；2×Direct PCR MasterMix在-20℃条件下可长期保存，多次冻融不会影响活性，如需经常使用，可存放于4℃。
注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
2．组织裂解缓冲液Tissue Lysis Buffer应放置于室温保存，如放在低温（-20℃或4℃）保存时有沉淀析出，可在37℃水浴中重新溶解沉淀，并摇匀溶液后使用。
3．本制品提供的2×Direct PCR MasterMix为2×母液，使用时需加入模板和引物，并加入灭菌水补足体积，使其浓度为1x即可进行反应。
操作步骤：
1．第一次使用本试剂盒时，请仔细查看组织裂解缓冲液Tissue Lysis Buffer中是否有结晶析出，如有结晶请将该缓冲液于室温充分平衡至结晶完全溶解，或在37℃水浴中重新溶解沉淀摇匀后使用。组织裂解缓冲液溶解后在室温保存。
2．按照下表配方配制组织消化液：
注意：消化液请尽量现用现配，以保证Digestive Enzyme的活性。
3．取少量小鼠组织样品（约5～10mg）于1.5mL的离心管中，加入100μL组织消化液，确保组织样品完全浸润于组织消化液中，65℃处理30min。期间每隔10min左右轻弹管底，提高消化效率。
4．消化结束后，瞬时离心，并于95～100℃下处理5min。
5．PCR扩增反应。取1μL上清用于PCR反应，参考PCR体系及扩增程序如下：
参考反应体系：
PCR反应体系的建立，25μL体系如下：
试剂全部加好后，混匀并瞬时离心，将所有试剂收集到管底。
参考反应条件：
*通常引物退火温度比引物的解链温度（Tm)低5℃，具体退火温度设定可根据引物情况进行调整。
结果检测：
反应结束后取5～10μL反应产物，进行琼脂糖凝胶电泳检测。
注意：举例仅供参考，实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据实际情况设定最佳反应条件。操作中如发现管壁或管盖上有液体可以瞬时离心将其甩至管底。
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本试剂盒提供的2×Direct PCR MasterMix是一种高扩增兼容性的PCR试剂，无需彻底去除蛋白等杂质，便能进行高效特异扩增。该预混Mix包含抗体修饰的Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂和稳定剂，操作时只需加入粗提模板和引物即可进行后续检测，具有操作简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点，特别适合于高通量的检测筛选。Mix中预混有电泳染料，可在反应结束后直接进行电泳检测，使用方便快捷。PCR产物的3′端带A，可进行TA克隆。
产品特点：
·简单快速：适用于从小鼠尾巴、耳朵以及脚趾等组织中一步法基因鉴定。
·高特异性：本制品所用Taq酶为抗体修饰热启动酶，具有高效的模板和引物亲和性及扩增特异性，特别适合基因分型和转基因鉴定。
·基因检测：本制品操作简便，结果可靠，特别适合小鼠的高通量分析检测。
| 组分 | 25μL×50rnx | 25μL×200rnx |
| Tissue Lysis Buffer | 5mL | 20mL |
| Digestive Enzyme | 200μL | 800μL |
| 2×Direct PCR MasterMix | 625μL | 2×1.25mL |
| RNase-Free ddH2O | 1mL | 2×1mL |
储存条件：组织裂解缓冲液Tissue Lysis Buffer和Digestive Enzyme在室温（15～25℃)干燥条件下可保存12个月；2×Direct PCR MasterMix在-20℃条件下可长期保存，多次冻融不会影响活性，如需经常使用，可存放于4℃。
注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
2．组织裂解缓冲液Tissue Lysis Buffer应放置于室温保存，如放在低温（-20℃或4℃）保存时有沉淀析出，可在37℃水浴中重新溶解沉淀，并摇匀溶液后使用。
3．本制品提供的2×Direct PCR MasterMix为2×母液，使用时需加入模板和引物，并加入灭菌水补足体积，使其浓度为1x即可进行反应。
操作步骤：
1．第一次使用本试剂盒时，请仔细查看组织裂解缓冲液Tissue Lysis Buffer中是否有结晶析出，如有结晶请将该缓冲液于室温充分平衡至结晶完全溶解，或在37℃水浴中重新溶解沉淀摇匀后使用。组织裂解缓冲液溶解后在室温保存。
2．按照下表配方配制组织消化液：
| 加入物 | 加入量 |
| Tissue Lysis Buffer | 96μL |
| Digestive Enzyme | 4μL |
注意：消化液请尽量现用现配，以保证Digestive Enzyme的活性。
3．取少量小鼠组织样品（约5～10mg）于1.5mL的离心管中，加入100μL组织消化液，确保组织样品完全浸润于组织消化液中，65℃处理30min。期间每隔10min左右轻弹管底，提高消化效率。
4．消化结束后，瞬时离心，并于95～100℃下处理5min。
5．PCR扩增反应。取1μL上清用于PCR反应，参考PCR体系及扩增程序如下：
参考反应体系：
PCR反应体系的建立，25μL体系如下：
| 加入物 | 加入量 |
| 2×Direct PCR MasterMix | 12.5μL |
| 正向引物（10μM） | 0.5μL |
| 反向引物（10μM | 0.5μL |
| 模板DNA | 1.0μL |
| RNase-Free ddH2O | 补至25μL |
试剂全部加好后，混匀并瞬时离心，将所有试剂收集到管底。
参考反应条件：
| 温度 | 时间 | 循环数 |
| 95℃ | 3min | 1cycle |
| 94℃ | 30sec | 35cycles |
| 55℃* | 30sec | |
| 72℃ | 1kb/min | |
| 72℃ | 5min | 1cycle |
| 4℃ | Holding | 1cycle |
*通常引物退火温度比引物的解链温度（Tm)低5℃，具体退火温度设定可根据引物情况进行调整。
结果检测：
反应结束后取5～10μL反应产物，进行琼脂糖凝胶电泳检测。
注意：举例仅供参考，实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据实际情况设定最佳反应条件。操作中如发现管壁或管盖上有液体可以瞬时离心将其甩至管底。
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